产品目录

本产品是一种用于分离大鼠外周血中单个核细胞（主要为淋巴细胞）的无菌的密度梯度细胞分离液。其原理是根据大鼠外周血中各种细胞的密度不同，使用特定密度的细胞分离液（为1.084），经过梯度离心，可以使细胞在较短的时间内按照相应的密度梯度分布，从而将血液中的淋巴细胞分离出来。无菌条件下分离的淋巴细胞可用于后续培养。

为了产品使用起来的方便与高效，本试剂盒配置了分离淋巴细胞过程中专用的样本稀释液、细胞清洗液和台盼蓝染色液。使用本试剂盒中的细胞清洗液清洗细胞可以极大的提高细胞回收率，减少在后续清洗过程中造成的细胞损失。

• 开封前请将本产品颠倒混匀，本分离液为无菌产品，为延长分离液保存时间，请在无菌条件下启封，启封后置于4℃保存，防止微生物污染。
  
• 室温下分离效果最好（20±2℃），低温可能会导致白膜层中红细胞污染严重，高温可能会导致分离出的细胞数变少。
  
• 血液样本最好为新鲜的抗凝血（2h以内），为保持细胞的活性，避免冷冻和冷藏。血液放置超过6h会导致分离效果变差甚至不能达到分离目的。
  
• 为保证本产品能够达到最佳的分离效果，请使用本试剂盒内配置的专用的细胞清洗液和样本稀释液进行操作。
  
• 部分塑料制品（如聚苯乙烯）因其带有静电作用，可能会导致细胞挂壁，影响分离效果。
  
• 吸取过多的分离液层可能会导致混杂的粒细胞数量增加；吸取过多的血浆层可能会导致细胞中血浆蛋白及血小板污染。
  
• 如果要进一步对分离的细胞进行培养，需要在收集血液和分离的过程中，注意无菌操作。

• 取新鲜的大鼠的抗凝血全血（EDTA、枸橼酸钠或肝素抗凝即可）或者去纤维蛋白血液，用等体积的本试剂盒中的样本稀释液稀释全血。
  
• 在离心管中加入适量分离液（当稀释后血液体积小于3mL时，加入3mL分离液；大于等于3mL加入等体积分离液。但二者的总体积不能超过离心管的三分之二，否则会影响分离效果），将稀释后的血液平铺到分离液液面上方，注意保持两液面界面清晰。（可以用巴氏德吸管吸取血液，然后将血液小心的平铺于分离液上。如果样品较多加样时间较长，在离心之前出现红细胞成团下沉属正常现象）
  
• 室温，水平转子400～1000g，离心20～30min。（血液体积越大所需的离心力越大，离心时间越长，可根据具体情况摸索最佳分离条件）
  
• 离心之后将出现明显的分层：最上层是稀释的血浆层，中间是透明的分离液层，血浆与分离液之间的白膜层即为目的细胞层，离心管底部是红细胞与粒细胞层。
  
• 小心的吸取白膜层细胞到15mL洁净的离心管中，加入5～10mL左右本试剂盒中的细胞清洗液洗涤细胞。250～500g离心5～10min。
  
• 洗涤2～3次，弃上清，用PBS重悬细胞备用。